精編免疫學實驗指南

譯者序
前言
第一章 免疫應答導論
單元1.1 黴聯免疫吸附試驗
基本方案 間接ELISA法檢測特異性抗體
備選方案1 直接競爭ELISA法檢測可溶性抗原
備選方案2 抗體夾心ELISA法檢測可溶性抗原
備選方案3 雙抗體夾心ELISA法檢測特異性抗體
備選方案4 夾心ELISA法檢測同種
備選方案5 直接細胞ELISA法檢測細胞表面抗原
備選方案6 間接細胞ELISA法檢測抗細胞表面抗原的特異性抗體
輔助方案 十字交叉連續稀釋分析法（criss-cross serial-dilution analysis）測定試劑最適濃度
單元1.2 多克隆抗血清的制備
基本方案 使用弗氏佐劑制備多克隆抗體的免疫接種法
備選方案 使用其他佐劑制備多克隆抗體的免疫接種法
輔助方案 從血液中制備血清
單元1.3 單克隆抗體的制備
基本方案1 單克隆抗體制備中的免疫接種
基本方案2 細胞融合與雜交瘤分選
輔助方案1 雜交瘤培養上清的篩選分析
輔助方案2 雜交瘤的建系
輔助方案3 有限稀釋克隆法
輔助方案4 克隆和擴增用培養基的制備
單元1.4 單克隆抗體培養上清與腹水的制備
基本方案1 單克隆細胞培養上清的制備
備選方案1 單克隆細胞培養上清的大規模制備
備選方案2 雜交瘤或細胞系細胞的大規模制備
基本方案2 含有單克隆抗體的腹水制備
單元1.5 免疫球蛋白G（IgG）的純化
基本方案1 硫酸銨沉澱和凝膠過濾導析
基本方案2 蛋白A交聯瓊脂糖凝膠親和層析
備選方案1 蛋白G交聯瓊脂糖凝膠親和層析
備選方案2 抗大鼠k鏈單克隆抗體交聯瓊脂糖凝膠親和層析
單元1.6 免疫球蛋白G（IgG）片段的水解
基本方案1 木瓜蛋白黴水解IgG成Fab片段摸索性試驗
基本方案2 木瓜蛋白黴水解IgG獲取Fab片段的大量制備
基本方案3 胃蛋白黴水解IgG成F（ab﹀）2片段的摸索性試驗
基本方案4 胃蛋白黴水解IgG獲取F（AB﹀）2片段的大量制備
單元1.7 免疫球蛋白M（IgM）和免疫球蛋白D（IgD）的純化
基本方案1 用透析和凝膠過濾層析法純化IgM
備選方案1 硫酸銨沉澱法純化IgM
備選方案2 甘露聚糖結合蛋白親和純化IgM
備選方案3 IgM純化試劑盒
基本方案2 凝集素親和層析法純化小鼠IgD
單元1.8 抗體可變區（V區）的克隆、表達和修飾
基本方案1 通過使用冗余引物克隆和表達免疫球蛋白可變區
輔助方案 TA載體的制備
基本方案2 用ELISA法鑒定轉染細胞分泌的抗體分子
基本方案3 轉染細胞分泌抗體分子的鑒定
單元1.9 核酸免疫
基本方案1 小鼠注射接種DNA
基本方案2 小鼠基因槍接種DNA
輔助方案1 包裹DNA的金粉顆粒的制備
輔助方案2 制備包裹有DNA的金粉顆粒的樣品管
輔助方案3 基因槍接種中氫氣壓力和顆粒大小的最優化
第二章 小鼠淋巴細胞功能的體內體外分析
單元2.1 小鼠單個核細胞的分離
基本方案 從脾髒、胸腺和淋巴結制備細胞懸液
輔助方案1 去除脾髒細胞懸液中的紅細胞
輔助方案2 一步梯度法去除死細胞
單元2.2 磁珠法分離T細胞和B細胞
基本方案1 用AUTOMACS系統進行總T細胞、CD4+細胞或CD8+T細胞的自動分離
基本方案2 使用AUTOMACS系統進行B細胞的自動分選
基本方案3 使用AUTOMACS系統進行輔助細胞的自動分選
基本方案1 用磁性分選柱手工操作分離淋巴細胞
基本方案4 用AUTOMACS系統自動分選CD4+CD25+抑制性細胞
基本方案2 用磁性分選柱手工操作分離CD4+CD25+抑制性細胞
單元2.3 樹突細胞的分離
基本方案1 塑料黏附和EA玫瑰花結富集DC
輔助方案 膠原黴消化制備脾髒細胞懸液
基本方案2 用小鼠骨髓前體細胞培養樹突細胞（DC）
單元2.4 從小鼠脾髒分離小鼠天然殺傷細胞
基本方案
單元2.5 B細胞功能的檢測
基本方案1 抗原特異性的抗體產生
基本方案2 Jerne-Nordin PFC測定法
基本方案3 Cunningham-Szenberg PFC測定法
備選方案1 改良Jerne-Nordin PFC測定法用于型特異性反應
備選方案2 改良Jerne-Nordin PFC測定法用于測定多克隆抗體反應
輔助方案1 制備瓊脂糖包被的玻片
輔助方案2 制備Cunningham-Szenberg小室
輔助方案3 三硝基苯半抗原（TNP）偶聯SRBC
輔助方案4 蛋白質A偶聯SRBC
輔助方案5 制備TNP-卵白蛋白
輔助方案6 用Percoll梯度離心純化靜息B細胞
單元2.6 B淋巴細胞活化的早期事件
基本方案1 BCR誘導的B細胞內鈣變化
基本方案2 蛋白質酪氨酸磷酸化的分析
基本方案3 細胞大小與B細胞活化分子表達的分析
單元2.7 B細胞功能的增殖檢測方法
基本方案 抗IgM與LPS刺激的B細胞增殖
備選方案1 用8-硫基　　（8-MG）刺激B細胞多克隆活化
備選方案2 用蛋白激黴C激活劑及鈣離子載體刺激B細胞多克隆活化
備選方案3 硫酸葡聚糖與poly（I:C）刺激B細胞多克隆活化
備選方案4 細胞數量增加的定量
單元2.8 BrdU檢測T細胞和B細胞增殖
基本方案
單元2.9 采用細胞內熒光染料CFSE檢測淋巴細胞的遷移和增殖
基本方案 淋巴細胞的CFSE標記
輔助方案 流式細胞儀分析CFSE標記的細胞
單元2.10 細胞毒性T淋巴細胞的誘導及檢測
基本方案1 從CTL前體中誘導細胞毒性
基本方案2 鉻釋放法分析CTL活性
輔助方案1 次要組織相容性抗奪的小鼠體內應答
輔助方案2 病毒抗原體內免疫小鼠
輔助方案3 TNP修飾靶/刺激細胞
輔助方案4 病毒感染靶/刺激細胞
備選方案1 多克隆CTL活性的誘導
備選方案2 CTL再定向殺傷活性的檢測
單元2.11 T淋巴細胞增殖實驗
基本方案1 未致敏T淋巴細胞的活化
備選方案1 用抗體激活未致敏的T細胞
備選方案2 混合淋巴細胞增殖實驗
輔助方案1 從抗原呈遞細胞或刺激細胞懸液中剔除T淋巴細胞
輔助方案2 輔助/刺激細胞的滅活
基本方案2 致敏T細胞的活化
基本方案3 CD4+CD25+T細胞的活化和抑制功能的檢測
基本方案3 CD4+CD25+T細胞抑制功能的兩步法檢測︰短期活化和擴增CD+CD25+T
單元2.12 T細胞克隆的建立
基本方案1 產生和維持同種反應性Th和CTL克隆
基本方案2 用可溶性蛋白抗原誘導Th克隆
輔助方案1 制備刀豆蛋白A活化的上清（Con A上清）
輔助方案2 制備混合淋巴細胞培養上清（MLC上清）
輔助方案3 制備PMA激活的EL-4淋巴瘤細胞上清（EL-4上清）
輔助方案4 用顯微操作的方法克隆
單元2.13 制備小鼠T細胞雜交瘤
基本方案 細胞融合和T細胞雜交瘤的選擇
輔助方案1 篩選表達CD3-TCR原始雜交稿
輔助方案2 篩選抗原特異性的雜交瘤
單元2.14 檢測凋亡和其他形式的細胞死亡
基本方案1 用活細胞或熒光染料定量細胞活性
基本方案2 DNA裂爭片段的定量
備選方案 計數放射性標記的DNA定量細胞中DNA片段
輔助方案1 用（125）I UdR和（51）Cr放射性標記細胞核
輔助方案2 用（3）H TdR放射性標記細胞核
第三章 細胞活化的生物化學
第四章 免疫熒光和細胞分離
第五章 細胞因子及其受體
第六章 天然免疫
第七章 抗原加工處理和呈遞
第八章 人類免疫學研究
第九章 HIV的檢測與分析
第十章 自身免疫性及炎癥性疾病動物模型
第十一章 傳染性疾病動物模型
第十二章 蛋白質分離和分析
第十三章 （月太）
第十四章 分子生物學
第十五章 免疫分子與受體工程學
附錄1 試劑與溶液
附錄2 實驗用小鼠、大鼠和倉鼠
附錄3 免疫學常用細胞實驗技術
附錄4 試劑和設備的供應商
參考文獻
索引

免疫學是生命科學與醫學領域的前沿學科，特別是從20世紀50年代以來，免疫學基礎理論和應用技術的快速發展推動了生物學、醫學、藥學乃至整個生命科學的發展，使得免疫學成為當今生命科學中的一門帶動性、支持性學科，其探索的重大科學問題與機體健康的維持和疾病的防治密切相關。眾所周知，免疫學技術的每一次進步均極大地推動了免疫學理論研究的重大突破和框架體系的發展，也為生物高技術產業化的發展做出了巨大貢獻，因此，免疫學技術的發明與應用是極為重要的，特別是當前生命科學發展日益迅猛，多個前沿領域的研究需要多學科的滲透與合作，將免疫學技術與其他相關學科的技術進行交叉融合顯得尤為重要。

Wiley實驗室手冊（Current Protocols，John Wiley & Sons，Inc．出版）是全球權威的生命科學實驗技術指南，其方案經不同實驗室廣泛驗證，並緊跟科研和技術發展的最前沿，定期更新。由著名免疫學家John E．Coligan等主編的《現代免疫學方法》（Current Protocols in Immunology，CPI）即是其中之一，自1991年出版至今，平均每年更新一次，成為免疫學領域廣為使用並得到好評的標志性的綜合實驗技術手冊。本書《精編免疫學實驗指南》（Short Protocols in Immunology）是CPI的精華版，內容涵蓋了免疫學常用實驗技術體系的理論背景、基本原理、標準方案和最新發展，其實驗操作簡明規範、步驟清晰、要點突出、可行性強。該指南不僅是免疫學研究人員特別是研究生的科研工具，而且對于生命科學其他領域的研究者也有很高的參考價值。因此，科學出版社的編輯邀請我們翻譯此書時，我們欣然接受。

第二軍醫大學免疫學研究所暨醫學免疫學國家重點實驗室的中青年研究人員承擔了本書的翻譯工作。他們多年來在相關領域從事一線研究工作，積累了豐富的理論和實踐經驗。在繁忙的教學和科研工作之余，他們花費了大量的時間和精力投入此書的翻譯，通力合作，終成此稿。對他們在翻譯此書過程中所表現出的科學精神、創業激情、團隊力量，深表欣慰。感謝科學出版社的編輯引進並將本書推薦給我們組織翻譯，感謝他們在編輯和文稿校對等方面所做的大量工作。最後，對在本書翻譯和出版過程中提供幫助的所有同行同事們表達誠摯的謝意。

本書的翻譯對譯者的學術水平和翻譯水平提出很高的要求，這對于參與此書翻譯的每一個成員都是一項挑戰。中譯本在內容上忠于原著，力求科學、準確、流暢。囿于時間和知識水平等的限制，雖反復斟酌但難以盡善盡美，疏漏之處在所難免，敬請各位專家和廣大讀者批評和指正。

希望《精編免疫學實驗指南》中譯本的出版，能對國內免疫學研究及相關學科領域的進一步發展起到推動作用。

曹雪濤
2008年6月12日于第二軍醫大學