現代生化技術(第三版)

第三版 前言
第二版 前言
第一版 前言

第一篇 生化分離技術
第一章 提取與沉淀分離技術
第一節 細胞破碎
一、機械破碎法
二、物理破碎法
三、化學破碎法
四、(酉每)促破碎法
第二節 提取
一、提取的方法
二、影響提取的因素
第三節 沉淀分離
一、鹽析沉淀法
二、等電點沉淀法
三、有機溶劑沉淀法
四、復合沉淀法
五、金屬鹽沉淀法
六、選擇性變性沉淀法
第四節 實驗
實驗1—1大腸桿菌細胞的超聲波破碎
實驗1—2枯草桿菌鹼性磷酸(酉每)的提取與鹽析
實驗1—3枯草桿菌DNA的提取與分離
實驗1—4酵母RNA的提取與分離
實驗1—5大蒜細胞SOD的提取與分離
實驗1—6大鼠肝rRNA的提取與分離
第二章 過濾與膜分離技術
第一節 非膜過濾
一、非膜過濾的分類
二、非膜過濾的操作過程
第二節 膜分離技術
一、膜分離的分類
二、膜分離的操作過程及其控制
第三節 實驗
實驗2—1胰凝乳蛋白(酉每)的透析脫鹽
實驗2—2糖化(酉每)的超濾分離
第三章 萃取分離技術
第一節 有機溶劑萃取
一、有機溶劑的選擇
二、有機溶劑萃取的操作過程
第二節 雙水相萃取
一、雙水相萃取的原理
二、雙水相萃取的操作過程
第三節 超臨界萃取
一、超臨界萃取的原理
二、超臨界萃取的操作過程
第四節 反膠束萃取
一、反膠束萃取的原理
二、反膠束萃取的操作過程
第五節 實驗
實驗3—1青蒿素的超臨界萃取分離
實驗3—2人生長激素的雙水相萃取分離
實驗3—3穿心蓮內酯的有機溶劑萃取
第四章 層析分離技術
第一節 吸附層析
一、吸附層析原理
二、吸附柱層析
三、聚 胺薄膜層析
四、其他吸附層析
第二節 分配層析
一、紙層析
二、薄層層析
三、氣相層析
第三節 離子交換層析
一、離子交換劑的選擇與處理
二、離子交換層析的操作過程
第四節 凝膠層析
一、凝膠層析的基本原理
二、凝膠的選擇與處理
三、凝膠層析操作過程
第五節 親和層析
一、親和層析母體和配基
二、親和層析方法
第六節 層析聚焦
一、交換劑和緩沖液體系
二、pH梯度的形成
三、層析聚焦的操作過程
第七節 實驗
實驗4—1蛋白質溶液的凝膠層析脫鹽
實驗4—2氨基酸的紙層析
實驗4—3核 酸的離子交換層析
實驗4—4胰蛋白(酉每)的親和層析
實驗4—5凝膠層析測定蛋白質的相對分子質量
實驗4—6DNS—氨基酸的聚 胺薄膜層析
實驗4—7醇酯成分的氣相層析
實驗4—8膽酸混合液的薄層層析
第五章 電泳技術
第一節 電泳的基本原理
第二節 紙電泳
一、緩沖液的選擇
二、濾紙的選擇與剪裁
三、電泳操作要點
第三節 薄層電泳
第四節 薄膜電泳
第五節 凝膠電泳
一、聚丙烯 胺凝膠的制備原理
二、不連續電泳中樣品壓縮成層的原理
三、SDS—凝膠電泳原理
四、凝膠電泳的操作要點
第六節 等電點聚焦電泳
一、穩定pH梯度的形成
二、兩性電解質載體
三、支持pH梯度的介質
四、等電點聚焦電泳的操作要點
第七節 實驗
實驗5—1核 酸的紙電泳
實驗5—2蛋白質的醋酸纖維薄膜電泳
實驗5—3DNA的瓊脂糖凝膠電泳
實驗5—4蛋白質的聚丙烯 胺凝膠電泳
實驗5—5SDS—聚丙烯 胺凝膠電泳測定蛋白質的相對分子質量
實驗5—6蛋白質的二元凝膠電泳
第六章 離心分離技術
第一節 離心機的選擇
一、常速離心機
二、高速離心機
三、超速離心機
第二節 離心方法的選擇
一、差速離心
二、密度梯度離心
三、等密度梯度離心
第三節 離心條件的確定
一、離心力
二、離心時間
三、溫度
四、pH
第四節 實驗
實驗6—1細菌核糖體的分離
實驗6—2大腸桿菌細胞膜的分離
實驗6—3RNA的蔗糖密度梯度離心分離
實驗6—4大鼠肝細胞核的分離

第二篇 生化檢測技術
第七章 化學檢測技術
第一節 糖類的化學檢測
一、藍一愛農法
二、斐林試劑快速法
三、次碘酸鈉法
四、銅試劑法
第二節 蛋白質和氨基酸的化學檢測
一、定氮法測定蛋白質的含量
二、雙縮 試劑法測定蛋白質含量
三、福林一酚試劑法測定蛋白質含量
四、蛋白質N端氨基酸丹磺 化測定法
五、蛋白質的氨基酸排列順序測定——埃德曼分析法
六、蛋白質N端氨基酸2，4—二硝基氟苯測定法
七、 三酮顯色法測定氨基酸含量
八、甲醛滴定法測定氨基酸
第三節 蛋白質的免疫化學檢測
一、基本概念與原理
二、蛋白質的免疫化學檢測方法
第四節 核酸的化學檢測
一、定磷法測定核酸含量
一、二苯胺法測定DNA含量
三、地衣酚法測定RNA含量
第五節 實驗
實驗7—1斐林試劑置換法測定還原糖
實驗7—2葡萄糖淀粉(酉每)的活力測定
實驗7—3微量凱氏定氮法測定總氮量
實驗7—4福林—酚試劑法測定蛋白質含量
實驗7—5丹磺 化法分析蛋白質N端氨基酸
實驗7—6異硫氰酸苯酯分析法測定 鏈的氨基酸排列次序
實驗7—7 三酮顯色法測定氨基酸含量
實驗7—8雙向免疫擴散法測定抗血清效價
實驗7—9定磷法測定核酸含量
實驗7—10地衣酚顯色法測定核糖核酸（RNA）含量
實驗7—11二苯胺顯色法測定DNA含量
第八章 光學檢測技術
第一節 旋光檢測技術
一、原理
二、操作要點
第二節 熒光檢測技術
一、鄰苯二甲醛熒光分析法測定氨基酸
二、熒光胺熒光分析法測定 含量
第三節 分光光度檢測技術
一、原理
二、操作要點
第四節 實驗
實驗8—1旋光法測定味精的純度
實驗8—2熒光法測定核黃素含量
實驗8—3熒光法測定氨基酸含量
實驗8—4紫外線吸收法測定核酸含量
實驗8—5紫外線吸收法測定蛋白質含量
第九章 (酉每)學檢測技術
第一節 (酉每)學檢測技術的特點
一、(酉每)學檢測的專一性強
二、(酉每)學檢測的靈敏度高
三、(酉每)學檢測的速度快
四、(酉每)學檢測的條件溫和
第二節(酉每)法分析技術
一、(酉每)法分析的基本過程
二、常用於(酉每)法分析的(酉每)及其檢測方法
第三節(酉每)聯免疫吸附檢測技術
一、ELISA的基本原理
二、ELISA常用的標記(酉每)
三、常用的ELISA方法
四、ELISA技術的應用
第四節實驗
實驗9—1利用(酉每)法分析測定雞蛋中總膽固醇的含量
實驗9—2利用(酉每)法分析快速測定發酵液中的L—乳酸
實驗9—3利用(酉每)法分析測定發酵液中葡萄糖的濃度
實驗9—4(酉每)聯免疫吸附檢測法（雙抗體夾心法）檢測艱難梭菌毒素
實驗9—5(酉每)聯免疫吸附檢測法（間接法）測定兔血清免疫球蛋白IgG
第十章氣體檢測技術
第一節華勃氏呼吸儀檢壓法
第二節范•斯萊克檢測儀測定α—氨基酸含量
第三節實驗
實驗10—1酵母細胞耗氧量的測定
實驗10—2華勃氏呼吸儀測定L—谷氨酸脫羧(酉每)活力
實驗10—3華勃氏呼吸儀測定L—谷氨酸含量
第十一章生物檢測技術
第一節安全性試驗
一、毒性試驗
二、局部刺激性試驗
三、溶血試驗
四、熱原試驗
五、過敏試驗
第二節生長抑制物質的生物效價測定
一、稀釋法
二、擴散法
第三節生長促進物質的生物效價檢測
一、稀釋法
二、擴散法
三、比濁法
四、漓定法
第四節實驗
實驗11—1卡那霉素的效價測定
實驗11—2二環素的殺菌能力測定
實驗11—3細胞病變抑制法測定干擾素的效價
實驗11—4熱原試驗
第十二章放射性同位素檢測技術
第一節基本知識
一、放射性同位素
二、放射性同位素的衰變與射線
三、衰變規律
四、放射線的防護
第二節放射性同位素的檢測
一、放射自顯影技術
二、蓋革計數管探測
三、閃爍計數器探測
第三節放射性同位素的摻人
第四節實驗
實驗12—1γ—32P—ATP的(酉每)促合成
實驗12—23H—蛋白質的生物合成
實驗12—33H—蛋白質凝膠的放射熒光顯影

第三篇 (酉每)、基因和細胞操作技術
第十三章(酉每)操作技術
第一節(酉每)生物合成的調節技術
一、(酉每)的誘導合成
二、(酉每)生物合成的阻遏
第二節(酉每)反應動力學的研究技術
一、(酉每)反應初速率的測定
二、底物濃度對反應速率的影響——Km和Umax的測定
三、最適溫度、熱穩定性和活化能的測定
四、最適pH的測定
五、(酉每)的激活與抑制
第三節(酉每)、細胞和原生質體固定化技術
一、吸附法固定化技術
二、包埋法固定化技術
三、結合法固定化技術
四、交聯固定化技術
第四節(酉每)分子修飾技術
一、金屬離子置換修飾
二、大分子結合修飾
三、(酉每)的側鏈基團修飾
四、 鏈有限水解修飾
五、核 酸鏈的剪切修飾
六、氨基酸置換修飾
七、核 酸置換修飾
八、(酉每)分子的物理修飾
第五節(酉每)分子定向進化技術
一、基因體外隨機突變技術
二、突變基因的高通量篩選技術
第六節實驗
實驗13—1β—半乳糖 (酉每)的誘導合成
實驗13—2無機磷酸對枯草桿菌鹼性磷酸(酉每)生物合成的阻遏作用
實驗13—3鹼性磷酸(酉每)的反應動力學性質
實驗13—4L—谷氨酸脫羧(酉每)的固定化
實驗13—5枯草桿菌細胞固定化
實驗13—6谷氨酸棒桿菌原生質體固定化
實驗13—7固定化原生質體生產谷氨酸脫氫(酉每)
實驗13—8采用易錯PCR技術提高扁桃酸酯(酉每)的立體選擇性
實驗13—9利用DNA重排技術提高β甘露聚糖(酉每)的溫度耐受性
第十四章基因操作技術
第一節基因的獲取技術
一、分離法
二、反轉錄法
三、化學合成法
四、聚合(酉每)鏈反應技術
第二節載體的制備技術
一、載體的分類
二、載體的制備
第三節DNA體外重組技術
一、黏性末端連接
二、平頭末端連接
三、修飾末端連接
第四節重組DNA引入受體細胞技術
一、受體細胞的篩選與處理
二、外源DNA引入受體細胞
第五節重組DNA的鑒定技術
一、DNA印跡技術
二、RNA印跡技術
三、蛋白質印跡技術
四、DNA序列測定技術
第六節實驗
實驗14—1大腸桿菌ColEI質粒的分離
實驗14—2重組DNA的細胞轉化
實驗14—3Sanger測序法測定基因的序列
實驗14—4DNA印跡雜交
實驗14—5PCR擴增目的基因
實驗14—6鹼裂解法提取質粒DNA
第十五章細胞操作技術
第一節動物細胞融合技術
一、細胞的制備
二、細胞融合
三、融合子的篩選
第二節原生質體融合技術
一、原生質體制備
二、原生質體融合
三、細胞壁的再生
四、融合子的篩選
第三節細胞拆合技術
一、細胞器的分離
二、細胞器重組
第四節實驗
實驗15—1枯草桿菌原生質體的制備
實驗15—2酵母原生質體的分離與再生
實驗15—3從胡蘿卜細胞分離原生質體
實驗15—4動物細胞微核體和胞質體的制備
主要參考文獻
附錄